作者：勵合
2020-01-01
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品牌：基華
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促銷(xiāo)價(jià)：
產(chǎn)品說(shuō)明
BL21是早開(kāi)發(fā)的用于原核表達的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達菌株均來(lái)源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動(dòng)子驅動(dòng)的蛋白表達(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統的表達（如：pGEX，pMAL質(zhì)粒）。
基因型
E.coli B F-dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
操作方法
1. BL21感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速[敏感詞]冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞[敏感詞]在冰中緩慢融化，[敏感詞]冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。
4. 誘導時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。
5. 為獲得需要量的蛋白，[敏感詞]誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。
