作者：勵合
2020-01-01
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品牌：基華
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產(chǎn)品說(shuō)明
TOP10菌株來(lái)源于MC1061菌株，是目前實(shí)驗室常用的感受態(tài)細胞之一，基因型與DH10B高度類(lèi)似 (DH10B為galE15型，而TOP10為galU型)。TOP10生長(cháng)速度快 (比DH5α快，但比Mach1-T1生長(cháng)速度慢)，10小時(shí)可見(jiàn)克隆，recA1和endA1的突變有利于[敏感詞]DNA的穩定和高純度質(zhì)粒DNA的提取?？捎糜跇嫿寺?，藍白斑篩選等實(shí)驗。
基因型
F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
操作方法
1. TOP10感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速[敏感詞]冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞[敏感詞]在冰中緩慢融化，[敏感詞]冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量
